IPTG (izopropil p-D-1-tiogalactopiranozid) pulbereeste un inductor binecunoscut utilizat pe scară largă în biologia moleculară pentru exprimarea proteinelor recombinante în celulele gazdă, de obicei E. coli. În acest blog, vom explora modul în care pulberea IPTG afectează expresia proteinelor în diferite faze de creștere ale celulelor gazdă. În calitate de furnizor de încredere de pudră IPTG, avem cunoștințe aprofundate despre aplicațiile și impactul acestuia și suntem dornici să vă împărtășim aceste informații.
Cod produs: BM-2-5-133
Nume: Iptg
Nr. CAS: 367-93-1
MF: C9H18O5S
MW: 238,3
Nr. EINECS: 206-703-0
Piață: Indonezia, Marea Britanie, Noua Zeelandă, Canada etc.
Producător: BLOOM TECH Guangzhou Factory
Serviciu tehnologie: Departamentul Cercetare-Dezvoltare-4
Livrare: livrare ca un alt nume de compus chimic fără sensibilitate.
Oferim pudră Iptg, vă rugăm să consultați următorul site web pentru specificații detaliate și informații despre produs.
Produs:https://www.bloomtechz.com/synthetic-chemical/api-researching-only/iptg-powder-cas-367-93-1.html
Înțelegerea rolului IPTG în exprimarea proteinelor
IPTG este un analog al alolactozei, un metabolit al lactozei. În sistemul operon lac al E. coli, proteina represor lac se leagă de regiunea operatorului în condiții normale, împiedicând transcrierea genelor din aval, care sunt responsabile de metabolismul lactozei. Când IPTG este prezent, se leagă de represorul lac, provocând o schimbare conformațională a represorului și eliberându-l de la operator. Acest lucru permite ARN polimerazei să se lege de promotor și să inițieze transcripția genelor țintă, ducând la exprimarea proteinelor corespunzătoare.
Diferite faze de creștere ale celulelor gazdă
Celulele gazdă, cum ar fi E. coli, trec prin mai multe faze distincte de creștere: faza de întârziere, faza exponențială, faza staționară și faza de moarte.
Faza de întârziere: Aceasta este faza inițială în care celulele se adaptează la noul mediu. Celulele sunt active din punct de vedere metabolic, dar nu se divid rapid. Ei sintetizează enzimele și componentele necesare pentru a se pregăti pentru creștere.
Faza exponentiala: În această fază, celulele se divid într-un ritm constant și rapid. Numărul de celule se dublează la intervale regulate. Activitatea metabolică a celulelor este la un nivel ridicat și sintetizează în mod activ proteine și alte componente celulare.
Faza staționară: Pe măsură ce nutrienții sunt epuizați și produsele reziduale se acumulează, rata de creștere încetinește, iar numărul de celule noi produse este egal cu numărul de celule care mor. Populația celulară atinge un platou.
Faza Morții: Din cauza lipsei de nutrienți și a prezenței deșeurilor toxice, numărul de celule muribunde depășește numărul de celule noi, iar populația de celule începe să scadă.
Efectele IPTG asupra expresiei proteinelor în diferite faze de creștere
Faza de întârziere
Adăugarea IPTG în timpul fazei de întârziere poate să nu fie foarte eficientă pentru exprimarea proteinei. Deoarece celulele sunt încă în stadiul de adaptare, mașina lor metabolică nu este pe deplin operațională. Celulele au nevoie de timp pentru a se adapta la noul mediu, pentru a sintetiza enzimele esențiale și pentru a construi componentele celulare necesare. Introducerea IPTG în această etapă poate să nu conducă la transcrierea și traducerea eficientă a genelor țintă. Este posibil ca celulele să nu aibă suficiente resurse sau mecanisme de reglare adecvate pentru a răspunde la inductor.
Faza exponentiala
Faza exponențială este în general considerată momentul optim pentru a adăuga IPTG pentru exprimarea proteinei. În această fază, celulele cresc rapid, iar activitatea lor metabolică este ridicată. Ribozomii, ARN polimerazele și alte mașini de translație și transcripție sunt foarte active. Când se adaugă IPTG, acesta se poate lega rapid de represorul lac, permițând transcrierea genelor țintă să continue. Ca rezultat, o cantitate mare de proteină țintă poate fi sintetizată într-un timp relativ scurt. Mai mult, celulele au suficientă energie și resurse pentru a sprijini sinteza proteinei recombinante.
Faza staționară
Adăugarea IPTG în timpul fazei staționare poate duce la o expresie limitată a proteinei. În această etapă, celulele sunt sub stres din cauza epuizării nutrienților și a acumulării de deșeuri. Activitatea metabolică a celulelor a scăzut, iar mecanismul celular poate să nu fie la fel de eficient ca în faza exponențială. Deși IPTG se poate lega încă de represorul lac și poate iniția transcripția, este posibil ca celulele să nu aibă suficientă energie sau resurse pentru a produce o cantitate mare de proteină țintă. În plus, stabilitatea proteinei exprimate poate fi afectată de condițiile de stres în faza staționară.
Faza Morții
Nu este recomandabil să adăugați IPTG în timpul fazei de deces. Celulele mor, iar funcțiile lor metabolice sunt grav afectate. Mașinile celulare se defectează, iar capacitatea de a sintetiza proteine este aproape inexistentă. Adăugarea IPTG în această etapă nu va duce la nicio expresie semnificativă a proteinei.
Optimizarea expresiei proteinelor induse de IPTG
Pentru a obține cele mai bune rezultate de exprimare a proteinelor, trebuie luați în considerare mai mulți factori.
Concentrația IPTG: Concentrația optimă de IPTG depinde de celulele gazdă specifice și de proteina țintă. O concentrație prea mică poate să nu inducă în totalitate expresia genei țintă, în timp ce o concentrație prea mare poate fi toxică pentru celule și poate afecta creșterea și sinteza proteinelor acestora.
Timp de inducție: Durata inducției joacă, de asemenea, un rol crucial. Un timp de inducție mai lung poate duce la producții mai mari de proteine, dar poate crește și riscul de degradare a proteinelor și acumularea de deșeuri toxice.
Condiții de creștere: Menținerea condițiilor optime de creștere, cum ar fi temperatura, pH-ul și disponibilitatea nutrienților, este esențială pentru exprimarea eficientă a proteinelor. Acești factori pot afecta rata de creștere și activitatea metabolică a celulelor gazdă.
Produse înrudite și aplicațiile acestora
În calitate de furnizor de pulbere IPTG, oferim și alte produse chimice de înaltă calitate în scopuri de cercetare. De exemplu,Filgotinib CAS 1206161-97-8este un compus care a demonstrat potențial în domeniul cercetării antiinflamatorii.4-Bromotrifenilamină CAS 36809-26-4este utilizat pe scară largă în sinteza organică și știința materialelor.10-HDA CAS 14113-05-4are diverse activități biologice și prezintă interes în domeniul cercetării farmaceutice.
Produsul nostru
Concluzie și apel la acțiune
În concluzie, momentul adăugării pulberii IPTG în timpul fazelor de creștere a celulelor gazdă este crucial pentru exprimarea eficientă a proteinei. Faza exponențială este, în general, cel mai bun moment pentru inducție, în timp ce adăugarea IPTG în timpul fazelor de întârziere, staționară sau de moarte poate să nu dea rezultate satisfăcătoare. Prin optimizarea atentă a concentrației IPTG, a timpului de inducție și a condițiilor de creștere, cercetătorii pot obține o exprimare a proteinelor la nivel înalt.
Dacă sunteți interesat de pudra noastră IPTG sau de alte produse chimice, vă invităm să ne contactați pentru achiziții și discuții suplimentare. Ne angajăm să oferim produse de înaltă calitate și servicii excelente pentru clienți pentru a vă satisface nevoile de cercetare.
Referințe
- Miller, JH (1972). Experimente de genetică moleculară. Laboratorul Cold Spring Harbour.
- Sambrook, J. și Russell, DW (2001). Clonarea moleculară: un manual de laborator. Presa de laborator Cold Spring Harbor.
- Studier, FW și Moffatt, BA (1986). Utilizarea bacteriofagului T7 ARN polimerazei pentru a direcționa expresia selectivă la nivel înalt a genelor clonate. Journal of Molecular Biology, 189(1), 113-130.