Voi, colegi pasionați de proteine! Astăzi, sunt încântat să mă afund într-un subiect fierbinte în lumea producției de proteine recombinante: cum cantitatea de pulbere IPTGfolosit poate afecta total randamentul acelor proteine recombinante atât de valoroase. În calitate de furnizor de pudră IPTG, am văzut direct cum această pudră mică poate face sau distruge jocul tău de producție de proteine.
Pudră Iptg
Cod produs: BM-2-5-133
Nume: Iptg
Nr. CAS: 367-93-1
MF: C9H18O5S
MW: 238,3
Nr. EINECS: 206-703-0
Producator: BLOOM TECH Wuxi Factory
Analiză: HPLC, LC-MS, HNMR
Piața principală: SUA, Australia, Brazilia, Japonia, Germania, Indonezia, Marea Britanie, Noua Zeelandă, Canada etc.
Suport tehnologic: Departamentul de cercetare-dezvoltare-4
Noi oferimpulbere IPTG, vă rugăm să consultați următorul site web pentru specificații detaliate și informații despre produs.
Produs:https://www.bloomtechz.com/synthetic-chemical/api-researching-only/iptg-powder-cas-367-93-1.html
În primul rând, să trecem rapid peste ce este IPTG. IPTG, sau izopropil β - D - 1 - tiogalactopiranozid, este un compus chimic binecunoscut care este utilizat ca inductor în producerea de proteine recombinate. Imită inductorul natural alolactoza și se leagă de represorul lac, care permite apoi transcrierea genei țintă. În termeni mai simpli, este ca cheia care descuie ușa pentru ca bacteriile tale să înceapă să producă proteina recombinată pe care o urmărești.
Deci, să vorbim despre relația dintre cantitatea de pulbere IPTG și randamentul de proteine recombinate. În general, ați putea crede că mai mult IPTG înseamnă mai multe proteine. Dar nu este chiar atât de simplu. E ca și cum ai coace o prăjitură. Adăugarea prea mult zahăr nu face întotdeauna tortul mai bun; de fapt, o poate strica.
Niveluri scăzute de IPTG
Când utilizați o cantitate mică de pulbere IPTG, inducerea producției de proteine recombinante este puțin mai lentă. Represorul lac nu este complet inhibat, așa că doar un număr mic de gene sunt transcrise la un moment dat. Acest lucru poate duce la un randament global mai mic al proteinei recombinate. Dar există câteva avantaje. În primul rând, bacteriile sunt mai puțin stresate. Gândiți-vă la asta ca la bacterii care au un mediu de lucru ușor. Ei pot produce încet și constant proteina și, adesea, este mai probabil ca proteina să fie în forma sa corectă, pliată. Acest lucru este foarte important dacă sunteți în căutarea unei proteine funcționale.
Cu toate acestea, dezavantajul este că procesul de producție durează mai mult. Dacă vă grăbiți să obțineți o cantitate mare de proteină recombinată, inducerea IPTG la nivel scăzut ar putea să nu fie cel mai bun pariu. De exemplu, dacă lucrați la un proiect de cercetare sensibil la timp, în care trebuie să finalizați mai multe runde de experimente cu o cantitate decentă de proteine, așteptarea mult timp ca proteina să se acumuleze pur și simplu nu o va reduce.
Niveluri ridicate de IPTG
Pe de altă parte, utilizarea unei cantități mari de IPTG vă poate oferi un început rapid la producția de proteine. Represorul lac este complet copleșit și un număr mare de gene sunt transcrise simultan. Acest lucru duce adesea la o creștere rapidă a producției de proteine recombinate și puteți obține un randament mai mare într-o perioadă mai scurtă. Este ca și cum ai da bacteriilor o lovitură mare în pantaloni pentru a începe să lucreze peste program.
Dar aici este prinderea. Nivelurile ridicate de IPTG pot fi toxice pentru bacterii. Îi poate stresa atât de mult încât încep să moară sau să devină mai puțin eficienți în producerea proteinei. De asemenea, este posibil ca proteina să nu se plieze corect. Atunci când bacteriile sunt bombardate cu o cerere mare pentru a produce proteine, s-ar putea să nu aibă suficient timp sau resurse pentru a o plia în mod corespunzător. Acest lucru poate duce la formarea de corpuri de incluziune,
care sunt agregate de proteine prost pliate. Aceste corpuri de incluziune sunt o durere de tratat, deoarece apoi trebuie să treci printr-un proces complex de solubilizare și repliere a proteinei.
Găsirea punctului dulce
Deci, cum găsești cantitatea potrivită de pudră IPTG de utilizat? Ei bine, depinde de o grămadă de factori. Tipul de bacterii pe care îl utilizați este unul mare. Diferite tulpini de bacterii au sensibilități diferite la IPTG. Unii pot face față unei doze mai mari fără a fi prea stresați, în timp ce alții sunt mai delicati.
Condițiile de creștere ale bacteriilor contează și ele. Lucruri precum temperatura, tipul de mediu și nivelul de oxigen pot afecta modul în care bacteriile răspund la IPTG. De exemplu, dacă bacteriile cresc într-un mediu bogat, acestea ar putea fi mai rezistente la efectele IPTG de nivel înalt.
Un alt lucru de luat în considerare este natura proteinei recombinante în sine. Dacă proteina este foarte complexă sau are multe legături disulfurice, este posibil să doriți să utilizați o cantitate mai mică de IPTG pentru a oferi bacteriilor mai mult timp să se plieze corect.
În calitate de furnizor de pudră IPTG, mi se cere adesea recomandări cu privire la cantitatea de utilizat. Și răspunsul meu este întotdeauna: „Depinde”. Dar pot oferi câteva îndrumări generale. Un loc bun pentru a începe este cu un interval de concentrație de 0,1 - 1 mM de IPTG. Apoi puteți face câteva experimente la scară mică pentru a vedea cum răspunde sistemul dvs. specific. Încercați diferite concentrații în acest interval și măsurați randamentul și calitatea proteinelor.
Acum, să aruncăm o privire la câteva exemple din lumea reală. Într-un proiect de cercetare în care oamenii de știință încercau să producă o anumită enzimă, au folosit inițial o concentrație scăzută de IPTG (0,1 mM). Randamentul proteic a fost relativ scăzut, dar enzima a fost foarte activă, ceea ce indică faptul că a fost bine pliată. Când au crescut concentrația IPTG la 1 mM, randamentul a crescut, dar activitatea enzimatică a scăzut. O analiză ulterioară a arătat că au existat mai multe corpuri de incluziune la concentrația mai mare.
Într-un alt caz, o companie de biotehnologie producea o proteină terapeutică. Ei au descoperit că, optimizând cu atenție concentrația IPTG pe baza fazei de creștere a bacteriilor, au reușit să obțină un randament ridicat al proteinei pliate corect. Acest lucru nu numai că le-a economisit timp, dar a redus și costul procesării în aval.
Dacă sunteți pe piață pentru pulbere IPTG de înaltă calitate, vă avem acoperit. Pudra noastră IPTG este pură și fiabilă, asigurând rezultate consistente în producția de proteine recombinate. Și în timp ce ești aici, verifică câteva dintre celelalte produse excelente ale noastre. Poți găsiSevofluran pur CAS 28523 - 86 - 6,Pulbere de apigenină CAS 520 - 36 - 5, șiPulbere de acid elagic CAS 476 - 66 - 4pe site-ul nostru.
Dacă aveți întrebări despre cantitatea de pudră IPTG de utilizat pentru proiectul dvs. specific sau dacă sunteți interesat să achiziționați produsele noastre, nu ezitați să contactați. Suntem mereu aici pentru a vă ajuta să vă optimizați producția de proteine recombinate. Să lucrăm împreună pentru a obține cele mai bune rezultate pentru nevoile dvs. de cercetare sau producție!
Referințe
- Sambrook, J. și Russell, DW (2001). Clonarea moleculară: un manual de laborator. Presa de laborator Cold Spring Harbor.
- Studier, FW și Moffatt, BA (1986). Utilizarea bacteriofagului T7 ARN polimerazei pentru a direcționa expresia selectivă la nivel înalt a genelor clonate. Journal of Molecular Biology, 189(1), 113 - 130.
- Baneyx, F. (1999). Expresia proteinei recombinante în Escherichia coli. Biotehnologie și biochimie aplicată, 30(Pt 2), 101 - 106.