Retatrutide(legătură:https://www.bloomtechz.com/synthetic-chemical/peptide/retatrutide-powder-cas-2381089-83-2.html) este un agonist polipeptidic GLP-1R/GIPR/GCGR cu acțiune lungă sintetizat chimic, care este destinat pentru tratamentul diabetului zaharat de tip 2 la adulți, gestionarea greutății și ficatul gras nonalcoolic/steatohepatita nealcoolică. Indicația pentru diabet zaharat de tip 2 la adulți a acestui produs a fost aprobată pentru uz clinic în data de 29 august 2023. În plus, cererea de înregistrare clinică a indicațiilor pentru ficat gras nonalcoolic/steatohepatita nealcoolică se află în stadiul final de revizuire. Există opt agonişti GLP-1R/GIPR/GCGR în curs de dezvoltare în lume, dintre care Retatrutide de la Rita a făcut cel mai rapid progres şi a lansat a treia etapă a studiului clinic în iunie anul acesta. În aceeași lună, Rita a anunțat că datele de cercetare în faza a doua a retatrutidei au fost publicate la reuniunea anuală a ADA, arătând că la 24 de săptămâni, retatrutida (1 mg, 4 mg, 8 mg sau 12 mg) a atins obiectivul principal de eficacitate. evaluare pentru participanții obezi sau supraponderali fără diabet, cu o scădere în greutate medie de 17,5%. Printre obiectivele secundare, a fost atinsă o scădere în greutate medie de 24,2% la sfârșitul a 48 de săptămâni de tratament. De asemenea, am sintetizat peptida în laborator pe baza metodei publicate. Metoda specifică de sinteză va fi descrisă pe scurt, iar pașii specifici ne pot fi trimise prin e-mail.
Metoda 1:
Pașii detaliați pentru sintetizarea Retarutidei folosind sinteza în stare solidă în laborator sunt următorii:
Pregătiți reactivii și instrumentele necesare: inclusiv aminoacizi, diclormetan, carbonat de potasiu, silicagel etoxilat, acetonitril, piridină, N-metilmorfolină, sursă de clorură de diizopropiletil, acid trifluoracetic, DIPEA, aminoacizi protejați Boc și alți reactivi, precum și agitatori magnetici. , evaporatoare rotative și alte instrumente.
(1) Sinteza aminoacizilor protejați cu Boc: se dizolvă aminoacizii necesari în diclormetan, se adaugă pulbere de carbonat de potasiu, se amestecă uniform, se adaugă silicagel etoxilat, se continuă agitarea, apoi se adaugă piridină și N-metilmorfolină pentru a obține aminoacizi protejați cu Boc.
(2) Sinteza în fază solidă: Se amestecă acetonitril, sursa de clorură de diizopropiletil și acid trifluoracetic împreună, se amestecă uniform, se adaugă aminoacizi protejați cu Boc și se continuă agitarea pentru a obține produsul de sinteză în fază solidă.
(3) Grupa de deprotecție: se dizolvă sinteza în fază solidă în diclormetan, se adaugă acid trifluoracetic, se agită uniform și apoi se adaugă DIPEA. Se continuă agitarea pentru a obține sinteza în fază solidă deprotejată.
(4) Purificare: se dizolvă sinteza fazei solide deprotejate în apă, se ajustează pH-ul la aproximativ 9.0 cu soluție de hidroxid de sodiu, apoi se ajustează pH-ul la aproximativ 5.0 cu acid acetic și, în final, se precipită produsul pur cu eter.
Metoda 2:
Pașii detaliați pentru sintetizarea Retarutidei folosind sinteza în fază lichidă în laborator sunt următorii:
Pregătiți reactivii și instrumentele necesare: inclusiv arginină, glicină, anhidridă acetică, trietilamină, carbonat de potasiu, diclormetan, metanol, piridină, N-metilmorfolină, anhidridă acetică, acetat de sodiu și alți reactivi, precum și instrumente precum agitatoare, pâlnii de separare pompe de vid, cuptoare și coloane cromatografice.
(1) Se dizolvă arginină și glicină într-o cantitate adecvată de diclormetan, se adaugă o cantitate adecvată de anhidridă acetică și trietilamină și se agită uniform sub un agitator.
(2) Transferați amestecul dizolvat într-un cuptor și încălziți-l la 80 de grade C timp de 1 oră pentru a acetila reziduurile de aminoacizi.
(3) Neutralizați soluția reacționată cu pulbere de carbonat de potasiu pentru a neutraliza acidul acetic în soluție pentru a genera acetat de sodiu și apoi extrageți peptida generată cu diclormetan.
(4) Se spală soluția de peptidă extrasă cu metanol și se filtrează cu o pompă de vid pentru a obține peptida brută.
(5) Se dizolvă peptida brută într-o cantitate adecvată de piridină și N-metilmorfolină, se adaugă o cantitate adecvată de anhidridă acetică și acetat de sodiu și se agită uniform sub un agitator.
(5) Se filtrează soluția reacționată cu o pompă de vid, se spală turta de filtrare cu metanol și apoi se filtrează cu o pompă de vid pentru a obține Restarutida finală.
Metoda 3:
Pașii detaliați pentru sintetizarea Retarutidei folosind metode chimice în laborator sunt următorii:
Pregătiți reactivii și instrumentele necesare: inclusiv arginină, glicină, anhidridă acetică, trietilamină, carbonat de potasiu, diclormetan, metanol, piridină, N-metilmorfolină, anhidridă acetică, acetat de sodiu și alți reactivi, precum și instrumente precum agitatoare, pâlnii de separare pompe de vid, cuptoare și coloane cromatografice.
(1) Se dizolvă arginină și glicină într-o cantitate adecvată de diclormetan, se adaugă o cantitate adecvată de anhidridă acetică și trietilamină și se agită uniform sub un agitator.
(2) Transferați amestecul dizolvat într-un cuptor și încălziți-l la 80 de grade C timp de 1 oră pentru a acetila reziduurile de aminoacizi.
(3) Neutralizați soluția reacționată cu pulbere de carbonat de potasiu pentru a neutraliza acidul acetic în soluție pentru a genera acetat de sodiu și apoi extrageți peptida generată cu diclormetan.
(4) Se spală soluția de peptidă extrasă cu metanol și se filtrează cu o pompă de vid pentru a obține peptida brută.
(5) Se dizolvă peptida brută într-o cantitate adecvată de piridină și N-metilmorfolină, se adaugă o cantitate adecvată de anhidridă acetică și acetat de sodiu și se agită uniform sub un agitator.
(6) Se filtrează soluția reacționată cu o pompă de vid, se spală turta de filtrare cu metanol și apoi se filtrează cu o pompă de vid pentru a obține Restarutida finală.
Sunt necesare mai multe reacții de sinteză organică pentru a obține molecula țintă. În plus, această metodă utilizează mai mulți reactivi organici și condiții complexe de operare, astfel încât sinteza chimică a Rotarutidei în laborator nu este de obicei potrivită pentru producția pe scară largă sau aplicațiile industriale. Pentru producția pe scară largă sau aplicații industriale, metoda mai frecvent utilizată este prepararea Rotarutidei prin metode de sinteză, cum ar fi biosinteza sau sinteza în fază lichidă, care sunt relativ mici la scară de laborator, relativ simple în funcționare și potrivite pentru prepararea unor cantități mici de produse. . Retarutida obținută prin aceste metode este similară sau similară ca structură și activitate biologică cu Retarutida sintetizată prin metode chimice, dar are avantajele unui randament mai mare și o preparare mai ușoară. În același timp, au și un potențial de industrializare mai bun și perspective mai largi de aplicare.
Metoda 4:
Pașii detaliați pentru sintetizarea Retarutidei folosind metode biologice în laborator sunt următorii:
Prepararea genelor și reactivilor necesari: Obțineți plasmide care conțin gena Retatrutide din biblioteca de gene, transformați plasmidele cu celule primitoare (cum ar fi Escherichia coli) și obțineți bacterii de inginerie care conțin gena Retatrutide.
(1) Cultivarea bacteriilor de inginerie: În condiții adecvate de temperatură, pH și concentrație de ioni, utilizați un mediu de cultură pentru a cultiva bacterii de inginerie, permițându-le să prolifereze în cantități mari.
(2) Extracția Retarutidei: Bacteriile de inginerie cultivate sunt zdrobite cu un concasor, iar fragmentele de celule sunt separate de Retarutide folosind metode precum ultrafiltrarea și sedimentarea pentru a obține produsul brut.
(3) Purificarea Retarutidei: Retarutida brută este purificată folosind tehnologia cromatografiei pentru a obține Retarutidă de înaltă puritate.
Detectarea și identificarea Rotarutidei: Utilizați cromatografia lichidă de înaltă performanță, spectrometria de masă, rezonanța magnetică nucleară și alte tehnici pentru a detecta și identifica structura Rotarutidei purificate.
Ecuația reacției chimice pentru sinteza biologică a Retarutidei în laborator implică în principal reacțiile chimice din timpul procesului de exprimare a genelor, incluzând două etape: transcripție și translație.
Transcriere: ADN-ul dublu catenar se deschide, folosind o catenă ca matriță pentru a sintetiza catenele de ARN, ceea ce necesită implicarea ARN polimerazei. Ecuația reacției este următoarea:
ADN dublu catenar: DNApol → ARNm+DNApol
Traducere: Ribozomii se leagă de ARNm pentru a sintetiza lanțuri peptidice, un proces care necesită participarea aminoacizilor și a energiei. Ecuația reacției este următoarea:
Ribozom+ARNm → Lanț peptidic+GDP+Pi+H2O
Lanț peptidic+ATP → Lanț peptidic+AMP+PPi
Dintre acestea, DNApol reprezintă ADN polimeraza; MRNA reprezintă ARN mesager; Ribozomii reprezintă ribozomi; Lanțurile peptidice reprezintă lanțuri polipeptidice; PIB reprezintă guanozin difosfat; Pi reprezintă acid fosforic anorganic; H2O reprezintă apa; ATP reprezintă adenozin trifosfat; AMP reprezintă adenozin monofosfat; PPi reprezintă pirofosfatul anorganic. Aceste reacții generează lanțurile peptidice necesare pentru sinteza Retarutidei, care sunt apoi procesate și modificate în etapele ulterioare pentru a obține Retarutide.
Cele de mai sus sunt metode comune pentru sinteza Rotarutidei în laborator, fiecare cu avantaje, dezavantaje și domeniu de utilizare diferite. Laboratorul folosește de obicei metode de sinteză în fază lichidă și faza solidă pentru producția la scară mică pentru cercetare și utilizare experimentală; Producția industrială, pe de altă parte, adoptă o combinație de biosinteză și producție în fază lichidă/solidă pentru producția la scară largă pentru a satisface cererea pieței. Trebuie remarcat faptul că aceste metode necesită optimizarea strictă a stării și controlul procesului pentru a asigura calitatea și puritatea produsului final.