Proteinaza K pulbere CAS 39450-01-6

Shaanxi BLOOM Tech Co., Ltd. este unul dintre cei mai experimentați producători și furnizori de proteinază k pulbere cas 39450-01-6 din China. Bine ați venit la pudră de proteinază k cas 39450-01-6 în vrac de înaltă calitate, de vânzare aici din fabrica noastră. Sunt disponibile servicii bune și preț rezonabil.

Proteinaza K pulbereeste o serin protează nespecifică, foarte eficientă, utilizată pe scară largă în biologia moleculară și biochimie, în principal pentru degradarea proteinelor și îndepărtarea proteinelor contaminante din preparatele de acid nucleic. Este derivată din ciuperca Engyodontium album (fostă Tritirachium album) și își menține activitatea pe o gamă largă de temperaturi (20-60 grade) și pH (4-12), chiar și atunci când este incubată într-o soluție care conține SDS (0,5-1%) sau uree (4M) în condiții de denaturare.

Enzima descompune eficient o gamă largă de proteine, inclusiv RNază și DNază, prin scindarea legăturilor peptidice (hidrolizarea de preferință a capătului carboxil al aminoacizilor alifatici/aromatici) și, prin urmare, este utilizată pentru îndepărtarea nucleazei în extracția ADN/ARN pentru a asigura integritatea acidului nucleic. În plus, este utilizat în mod obișnuit în digestia tisulară (de exemplu, probe încorporate în parafină-), liza celulară și studiile de proteomică.

Pulberea de proteinază K este de obicei furnizată în formă liofilizată, care este foarte stabilă (-20 de grade pentru depozitare pe termen lung) și trebuie dizolvată într-un tampon (de exemplu Tris-HCl, EDTA) înainte de utilizare. Activitatea sa este dependentă de Ca2⁺, dar agenții de chelare precum EDTA inhibă doar parțial activitatea enzimatică. Autodegradarea trebuie evitată în timpul manipulării și se recomandă inactivarea căldurii la 65 de grade. Datorită capacității sale puternice de hidrolizare a proteinelor, este necesară o protecție atentă pentru a evita contactul cu pielea sau membranele mucoase.

Proteinaza k pulbere, cunoscută și ca Proteinaza K sau EC 3.4.21.14, este o serin protează izolată și purificată din Tritirachium album Limber. De la prima sa izolare de către Wolfgang Ebeling și colab. în 1974, proteinaza K a fost utilizată pe scară largă în biochimie, biologie moleculară, medicină și industrie datorită activității sale ridicate și specificității largi de substrat.

În procesul de extracție a ADN-ului și ARN-ului, principala funcție a proteinazei K este de a degrada proteinele legate de acizii nucleici, permițând ADN-ului sau ARN-ului să fie liber în soluție pentru extracția și purificarea ulterioară. Datorită stabilității și activității sale ridicate în agenți de denaturare precum ureea și SDS, proteinaza K este utilizată în mod obișnuit pentru izolarea plasmidelor sau ADN-ului și ARN-ului genomic.

proteinaza K poate inhiba activitatea ARN-azei și poate proteja ARN-ul de degradare.

1. Extracția ADN și ARN

 

Extracția ADN: Proteaza K poate hidroliza histonele care se leagă de ADN, permițând ADN-ului să se disocieze în soluție. Ulterior, impuritățile au fost îndepărtate prin diferite metode, cum ar fi extracția cu fenol cloroform, precipitarea cu etanol etc., și a fost colectat ADN purificat.
Extracția ARN: în timpul procesului de extracție a ARN, enzimele ARN sunt prezente în mod obișnuit în mediu, iar sistemul de probă în sine poate conține, de asemenea, enzime ARN, făcând ARN-ul foarte susceptibil la degradare. Adăugând o cantitate mică de

2. Tehnologia de hibridizare in situ

 

În tehnologia de hibridizare in situ, proteinaza K este utilizată în mod obișnuit pentru procesarea pre-hibridare pentru a digera proteinele din jurul ADN-ului țintă, a crește șansa de legare a sondei la acidul nucleic țintă și a îmbunătăți semnalul de hibridizare. Cu toate acestea, trebuie remarcat faptul că, atunci când concentrația de proteinază K este prea mare, timpul de digestie este prea lung sau temperatura de incubare este prea mare, poate provoca deteriorarea structurii celulare, ducând la eliminarea secțiunilor de țesut și la dispariția nucleelor ​​celulare, afectând astfel rezultatele hibridizării. Prin urmare, în aplicațiile practice, este necesar să se controleze strict concentrația și timpul de tratament al proteinazei K.

3. Inactivarea și dezinfectarea virusului

 

Proteaza K, datorită activității sale proteolitice puternice, poate fi utilizată pentru inactivarea și dezinfecția virusului. Cercetările au arătat că tratarea apei pure și a apelor uzate menajere cu o anumită concentrație de proteinază K poate inactiva efectiv virusurile. Proteaza K, ca dezinfectant care inactivează virusul, poate reduce potențialul daune cauzate de dezinfectanții chimici oxidativi convenționali asupra corpului uman, iar producția și transportul acesteia sunt sigure fără poluare ireversibilă a mediului.

4. Western blot și electroforeza pulsului

 

Proteaza K a fost, de asemenea, utilizată pe scară largă în prepararea ADN-ului cromozomial pentru electroforeza pulsată, Western blot și alte experimente. În experimentele Western blot, proteinaza K poate fi utilizată pentru a elimina proteinele ne-specifice din probă, îmbunătățind specificitatea și sensibilitatea petei. În experimentele de electroforeză în impulsuri, proteinaza K poate degrada impuritățile proteice din probele de ADN și poate îmbunătăți eficiența electroforezei.

5. Detectarea și identificarea proteinelor

 

Proteinaza k pulberepoate fi folosit și pentru detectarea și identificarea anumitor proteine. De exemplu, în studiul encefalopatiei spongiforme transmisibile (EST), proteinaza K poate fi utilizată pentru a digera proteinele din probele de țesut cerebral și pentru a identifica prezența proteinelor prionice prin detectarea rezistenței prionilor patogeni la proteinaza K. În plus, proteinaza K poate fi utilizată și pentru experimente, cum ar fi determinarea localizării enzimelor celulare și a enzimelor legate de membrană la proteinază. endotoxine (cum ar fi lizozima și ribonucleaza A).

1. Domeniul medical

 

Utilizare clinică: Proteaza K are o anumită valoare medicinală în medicină. De exemplu, tratarea indigestiei cu protează gastrică, tratarea bronșitei cu protează acidă, tratarea vasculitei cu elastază etc. În plus, tripsina, chimotripsina etc. sunt, de asemenea, utilizate în mod obișnuit pentru purificarea rănilor purulente chirurgicale și tratamentul adeziunilor serozale pleurale.
Detectarea și diagnosticarea virușilor: Proteaza K are, de asemenea, potențiale aplicații în detectarea și diagnosticarea virușilor. Prin digerarea proteinelor din proba de virus și expunerea acidului nucleic viral, oferă confort pentru testarea ulterioară a acidului nucleic.

2. Sectorul industrial

 

Industria pielarii: Proteaza K este folosita in industria pielii pentru epilare si tratament de catifelare, ceea ce poate economisi timp si imbunatati conditiile de igiena muncii.
Industria textilă: Proteaza K poate fi utilizată în industriile textile, cum ar fi degumarea mătăsii.
Industria alimentară: Proteaza K poate fi utilizată în industria alimentară pentru fragezirea cărnii, limpezirea alcoolului etc.
Detergent: detergentul de rufe cu adaos de enzime este un produs nou în detergenți. Detergentul de rufe care contine proteaza alcalina poate indeparta petele de sange si murdaria proteica de pe haine. Dar atunci când îl utilizați, aveți grijă să nu atingeți pielea pentru a evita deteriorarea proteinei de la suprafața pielii și provocarea de reacții alergice precum erupții cutanate și eczeme.

Caracteristici structurale

 

Greutatea moleculară a proteinazei K este de aproximativ 28900 daltoni (28,9 kDa) și există, de asemenea, rapoarte din literatură de 29,3 kDa. Secvența sa de aminoacizi și structura spațială tri-dimensională sunt foarte asemănătoare cu subtilizina din familia serin proteazelor, dar există și unele caracteristici unice.

Structura legăturii disulfurice: moleculele de protează K conțin legături disulfurice, care le măresc stabilitatea și le permit să mențină activitatea într-un interval larg de pH și în condiții de temperatură ridicată.
Situri de legare Ca ² ⁺:Proteinaza k pulbereconține două situsuri de legare a Ca ² ⁺, care, deși departe de centrul activ, sunt cruciale pentru menținerea activității catalitice a enzimei. Îndepărtarea Ca²⁺ va determina pierderea proteazei K a aproximativ 80% din activitatea sa, iar reintroducerea Ca²⁺ poate doar parțial să-și restabilească activitatea.
Triada catalitică: proteaza K are o triada catalitică Asp{0}}His69-Ser224, care este o structură cheie pentru activitatea sa hidrolitică.

Mecanismul de acțiune

 

Proteaza K poate hidroliza de preferință legăturile esterice și peptidice adiacente la capătul C-terminal al aminoacizilor hidrofobi, al aminoacizilor care conțin sulf- și al aminoacizilor aromatici, hidrolizând proteinele în peptide scurte. Mecanismul său de acțiune include în principal următoarele etape:

Legarea substratului enzimatic: După ce proteaza K este amestecată cu substratul, substratul se leagă de locul activ al enzimei, formând un complex de substrat enzimatic.
Reacție catalitică: Sub acțiunea situsului activ, legătura peptidică a substratului este hidrolizată pentru a forma un produs separat de enzimă.
Efectul puternic de degradare al proteazei K o face un reactiv cheie în diferite reacții biochimice, în special în procesele de extracție a ADN și ARN. Proteaza K poate degrada în mod eficient proteinele legate de acizi nucleici, eliberează acizi nucleici și inhibă activitatea nucleazelor, reducând degradarea acizilor nucleici în timpul extracției.

Proteinaza k pulbere, ca serin protează foarte activă și specifică substratului, are o gamă largă de aplicații în biochimie, biologie moleculară, medicină și industrie. Poate degrada proteinele care se leagă de acizi nucleici și eliberează acizi nucleici; Creșterea oportunității sondelor de a se lega de acizii nucleici țintă în tehnologia de hibridizare in situ; Folosit pentru inactivarea și dezinfectarea virusului; Îndepărtați impuritățile proteice în experimentele de electroforeză Western blot și puls; Are valoare medicinală în domeniul medicinei; Folosit în domenii industriale cum ar fi prelucrarea pielii, industria textilă, industria alimentară și fabricarea detergenților. Cu toate acestea, atunci când se utilizează proteinaza K, trebuie acordată atenție metodei de depozitare și condițiilor de utilizare pentru a asigura stabilitatea și activitatea acesteia.

Proteinaza K este o serin protează cu spectru larg-utilizată pe scară largă în biologie moleculară, biochimie și domenii de cercetare medicală, datorită proprietăților sale enzimatice și stabilității unice. Ca formă de pulbere liofilizată-, Proteinase K Powder joacă un rol crucial în experimente precum extracția acidului nucleic, digestia proteinelor și omogenizarea țesuturilor. Cu toate acestea, utilizarea oricărui reactiv biologic vine cu potențiale riscuri, iar reacțiile sale adverse pot implica sănătatea operatorilor și siguranța mediului experimental.

Tag-uri populare: proteinază k pulbere cas 39450-01-6, furnizori, producători, fabrică, en-gros, cumpărare, preț, vrac, de vânzare