Peptidă 3xFLAGeste o secvență importantă a markerului peptidic utilizat pe scară largă în procesele de exprimare a proteinelor și de purificare în cercetarea biomedicală. Formula moleculară C120H169N31O49S, CAS 402750-12-3. Compus din 23 de aminoacizi, secvența sa conține trei motive repetate ASP Tyr Lys XAA XAA ASP ASP, care îi conferă caracteristici structurale specifice. Are o solubilitate bună în solvenți specifici. De exemplu, în DMSO, solubilitatea sa este ridicată, ceea ce face convenabil pentru operațiuni și experimente în soluție. În plus, poate obține, de asemenea, un bun efect de dizolvare în apă prin încălzire ușoară. De asemenea, are câteva proprietăți speciale. De exemplu, are antigenicitate și reactivitate bună și se poate lega de anticorpi anti -steag specifici. Această abilitate de legare o face pe scară largă în experimente precum imunoprecipitarea. Prin legarea competitivă la anticorpii anti -steag, fuziunea de pavilion a exprimat proteina care se leagă de anticorpii anti -steag poate fi eluată în timpul imunoprecipitării, obținând astfel localizarea, detectarea și purificarea proteinei țintă.
|
Capace și plute personalizate:
|
|
|
Formula chimică |
C120H169N31O49S |
|
Liturghie exactă |
2860 |
|
Greutate moleculară |
2862 |
|
m/z |
2861 (100.0%), 2860 (77.0%), 2862 (32.9%), 2862 (31.4%), 2863 (22.1%), 2862 (11.5%), 2863 (10.1%), 2861 (8.8%), 2864 (8.1%), 2862 (7.8%), 2863 (7.4%), 2863 (5.3%), 2863 (4.5%), 2862 (3.5%), 2864 (3.3%), 2864 (3.2%), 2865 (2.2%), 2865 (2.1%), 2864 (2.1%), 2862 (1.9%), 2862 (1.9%), 2861 (1.5%), 2864 (1.5%), 2861 (1.4%), 2864 (1.4%), 2863 (1.2%), 2864 (1.2%) |
|
Analiza elementară |
C, 50.36; H, 5.95; N, 15.17; O, 27.39; S, 1.12 |
Peptidă 3xFLAGeste o etichetă folosită în cercetarea proteică, formată din 8 aminoacizi cu secvența dykdhdgdykdhdidykdddddk. Principala sa funcție este de a servi drept marker pentru exprimarea și purificarea proteinelor, oferind un mijloc convenabil și eficient în cercetare.
1. Purificarea afinității:
Poate fi utilizat ca etichetă pentru purificarea proteinelor și, prin afinitatea ridicată cu anticorpi anti -steag, proteina țintă poate fi purificată cu ușurință. De obicei, proteina țintă este transfectată în celule cu un vector de expresie care conține peptidă de pavilion 3x, și apoi purificată prin afinitate folosind anticorpi anti -steag pentru a obține rapid și eficient o proteină țintă de înaltă puritate.
2. Testarea imunologică:
Datorită imunogenității sale ridicate, poate fi utilizată pentru a detecta expresia proteinei și localizarea. Prin utilizarea anticorpilor anti -steag specifici, pot fi efectuate tehnici experimentale, cum ar fi imunoblotarea și colorarea imunofluorescenței pentru a detecta rapid și cu exactitate nivelul de expresie și distribuția proteinelor țintă.
3. Filtrarea clonelor:
Poate fi, de asemenea, utilizat pentru comoditatea screeningului clonelor de proteine. În procesul de construcție a vectorilor de expresie proteică, conectarea secvenței genelor proteinei țintă cuPeptidă 3xFLAGSecvența poate facilita screeningul clonelor pozitive cu proteina țintă prin detectarea imunității și alte metode, accelerând astfel procesul de cercetare a funcțiilor proteice.
4. Imunoprecipitare:
Poate fi, de asemenea, utilizat pentru experimente de imunoprecipitare proteică. Prin legarea proteinelor care conțin etichete peptidice cu pavilion 3x la anticorpi anti -steag, și apoi folosind materiale de adsorbție, cum ar fi agaroza proteică A/G sau margele magnetice, proteina țintă și partenerii săi care interacționează pot fi precipitate selectiv din extractele de celule pentru a studia rețeaua de interacțiune proteică.
5. Screening de droguri:
Poate fi utilizat și în cercetarea screeningului medicamentelor. Combinând eticheta peptidă cu pavilion 3x cu proteina de interes, se poate obține screeningul cu un randament ridicat al proteinei. Această metodă de screening poate fi utilizată pentru a descoperi noi ținte medicamentoase, pentru a evalua interacțiunile proteice medicamentoase și așa mai departe.
6. Cercetare funcțională proteică:
Introducerea etichetelor nu afectează în mod semnificativ structura și funcția naturală a proteinelor și, prin urmare, poate fi utilizată pentru a studia funcțiile biologice, localizarea subcelulară, interacțiunile și transducția semnalului proteinelor. Prin introducerea etichetei peptidice cu pavilion 3x, cercetările aprofundate pot fi efectuate pe caracteristicile biologice ale proteinelor, care ajută la dezvăluirea mecanismelor lor de acțiune în biologia celulară și fiziologie.
Peptidă 3xFLAGeste o peptidă care conține 8 aminoacizi, cu secvența dykdhdgdykdhdidykddddk. Este utilizat în mod obișnuit ca etichetă proteică pentru purificarea convenabilă, detectarea și cercetarea proteinelor țintă. În procesul de biosinteză, poate fi preparată prin sinteză chimică sau metode de inginerie genetică. Următoarele sunt etapele detaliate ale metodelor de inginerie genetică:
1. Proiectarea și sintetizarea genelor:
În primul rând, este necesară proiectarea unei gene artificiale care conține secvența peptidelor de pavilion 3x. Această genă ar trebui să conțină secvența peptidelor de pavilion 3x, precum și promotorii, terminatorii și markerii de selecție adecvați (cum ar fi genele de toleranță la antibiotice). Proiectarea genelor ar trebui să ia în considerare caracteristicile și nevoile de expresie ale gazdei țintă.
2. Clonarea genelor:
În continuare, genele artificiale proiectate vor fi donate în vectori de expresie adecvați. Vectorii folosiți frecvent includ plasmide, vectori virali, etc. Procesul de clonare include de obicei următorii pași:
-Amplificare PCR: Utilizarea reacției în lanț a polimerazei (PCR) pentru a amplifica secvența genelor țintă din ADN -ul șablonului.
-Digestion și conexiune: Produsele PCR sunt digerate cu vectori de expresie folosind endonucleaze de restricție, apoi conectate împreună de ligaze ADN.
-Rransformare: transformarea vectorului de expresie conectat în gazde bacteriene, cum ar fi Escherichia coli, pentru a forma o plasmidă recombinantă.
-Identificare: plasmidele recombinante au fost identificate prin PCR, digestia enzimei, secvențarea ADN -ului și alte metode pentru a confirma că gena țintă a fost clonă cu succes în vector.
3. Expresie proteină țintă:
Transfectarea vectorului de expresie construit în celulele gazdă țintă, cum ar fi celulele mamifere, celulele de drojdie, celulele insectelor, etc. În celule, vectorul de expresie este transcris în mRNA și apoi tradus în proteine . 3 X peptidă de pavilion va fi exprimată împreună cu proteina țintă ca o proteină.
4. Extracția proteinelor:
Colectați celule transfectate și efectuați fragmentarea celulelor, centrifugarea și alte tratamente pentru a obține extractul total de proteine.
5. Proteină purificată:
Folosind tehnici de purificare a afinității, cum ar fi imunoprecipitarea și cromatografia de afinitate, proteinele țintă care conțin etichete peptidice cu pavilion 3x au fost purificate din extractul total. Aceasta implică de obicei legarea anticorpilor anti -steag la proteinele care conțin peptidă 3x de pavilion și apoi separarea acestora folosind coloane de cromatografie de afinitate sau margele magnetice.
6. Identificați proteinele:
Proteina purificată a fost identificată și cuantificată prin electroforeză cu gel SDS-PAGE, imunoblotare, spectrometrie de masă și alte tehnologii pentru a-și asigura puritatea și integritatea.
Reacții adverse
În cercetarea biomedicală și experimentele legate de proteine, peptidele TAG joacă un rol crucial. Aceștia pot ajuta cercetătorii în purificarea, detectarea și localizarea proteinelor țintă, promovând foarte mult dezvoltarea științei proteinelor.Peptidă 3xFLAGeste o peptidă de etichetă comună și utilizată pe scară largă, compusă din trei secvențe de etichete de pavilion repetate. Eticheta de pavilion a fost proiectată inițial de Hopp și colab. În 1988, și ulterior s -a dezvoltat în variante precum 3xFLAG, care au o afinitate și specificitate ridicată și se pot lega de anticorpi specifici, facilitând izolarea și identificarea ulterioară. Deși peptida 3xFLAG a adus multe facilități în experimente, ca și alți agenți biologici, poate provoca, de asemenea, unele reacții adverse.
Reacții adverse legate imun
Imunogenitate
Imunogenitatea se referă la capacitatea unei substanțe de a stimula sistemul imunitar al organismului pentru a produce un răspuns imun . 3 peptida XFLAG, ca segment de peptide exogene, poate fi recunoscută de sistemul imunitar al organismului ca o componentă „non -self”, declanșând astfel un răspuns imun. Deși secvența 3XFLAG este relativ scurtă, în unele cazuri poate activa în continuare celulele B și celulele T, ceea ce duce la producerea de anticorpi. Acești anticorpi nu numai că se leagă de peptida 3xFlag liberă, dar pot recunoaște și se leagă și se leagă de proteinele de fuziune care exprimă eticheta 3xFLAG, afectând funcția normală și distribuția proteinei de fuziune.
Reacții alergice
Reacția alergică este un răspuns imun anormal cauzat de faptul că sistemul imunitar este excesiv de sensibil la anumiți alergeni. Persoanele individuale pot experimenta reacții alergice atunci când utilizează peptida 3xFLAG pentru experimentare sau tratament. Severitatea simptomelor reacțiilor alergice variază. Cazuri ușoare pot prezenta simptome locale, cum ar fi mâncărime, erupții cutanate și eritem, în timp ce cazurile severe pot declanșa reacții alergice sistemice, cum ar fi șocul anafilactic, caracterizate printr -o scădere accentuată a tensiunii arteriale, dificultăți de respirație și pierderea conștiinței, reprezentând o amenințare serioasă la siguranța vieții.
Reacții alergice
Mecanismul reacțiilor alergice este legat în principal de anticorpii IgE din sistemul imunitar. Când corpul intră mai întâi în contact cu peptida 3xFLAG, sistemul imunitar îl recunoaște ca un alergen și stimulează celulele B să producă anticorpi IgE specifici. Acești anticorpi IgE se atașează la suprafața mastocitelor și a eozinofilelor. Când corpul intră din nou în contact cu peptida 3xFLAG, acesta se leagă de anticorpii IgE de pe suprafața celulei, declanșând mastocite și eozinofile pentru a elibera mediatori bioactivi, cum ar fi histamină și leucotriene, ceea ce duce la apariția simptomelor alergice.
Riscul de boli autoimune
Expunerea pe termen lung sau repetată la peptida 3xFLAG poate crește riscul de a dezvolta boli autoimune. Bolile autoimune se referă la un tip de boală în care sistemul imunitar al organismului își atacă greșit propriile țesuturi și organe, ceea ce duce la deteriorarea țesuturilor și a deprecierii funcționale . 3 peptidă XFLAG poate induce sistemul imunitar să producă anticorpi reactivi încrucișați și celule T printr -un mecanism de simulare moleculară, unde se secvența de amino acid. Aceste celule imune și anticorpi nu numai că atacă peptida de 3xFlag străină, dar și deteriorează din greșeală țesuturile normale ale organismului, ceea ce duce la boli autoimune. De exemplu, anumite boli autoimune, cum ar fi lupusul eritematos sistemic și artrita reumatoidă pot fi legate de reacțiile autoimune induse de substanțele exogene. Deși în prezent nu există dovezi clare care să sugereze că peptida 3xFLAG provoacă direct boli autoimune, acest risc potențial nu poate fi ignorat.
Impactul asupra funcției celulare
Citotoxicitate
În unele studii experimentale, s -a constatat că concentrații mari de peptidă 3xFLAG pot avea efecte toxice asupra celulelor. Manifestările citotoxicității includ modificări ale morfologiei celulare, perturbarea integrității membranei celulare, modificări ale activității enzimei intracelulare și inhibarea proliferării celulare. Mecanismul său de acțiune poate fi legat de interacțiunea dintre peptida 3XFLAG și membrana celulară. Datorită încărcării negative puternice a peptidei 3xFLAG, se poate lega de componentele încărcate pozitiv pe membrana celulară prin interacțiuni electrostatice, modificând permeabilitatea și fluiditatea membranei celulare, ceea ce duce la scurgerea substanțelor intracelulare sau la intrarea substanțelor nocive din exterior, afectând astfel funcțiile fiziologice normale ale celulei. În plus, peptida 3xFLAG poate intra și în interiorul celulelor, interferează cu căile de semnalizare, sinteza proteinelor și alte procese, agravând în continuare deteriorarea celulelor.
Efecte asupra căilor de semnalizare celulară
Peptida 3xFLAG poate interfera cu căile de semnalizare intracelulare și poate afecta activitățile fiziologice normale ale celulelor. Calea de semnalizare celulară este un termen colectiv pentru o serie de evenimente moleculare în care celulele răspund la stimuli externi, reglând procese importante, cum ar fi creșterea celulelor, diferențierea și apoptoza . 3 peptidă XFLAG poate interfera cu transmiterea normală a căilor de semnalizare prin interacțiunea cu moleculele cheie în calea de semnalizare, modificarea activității sau a nivelurilor de exprimare ale moleculelor cheie. De exemplu, se poate lega de receptorii de pe suprafața celulei, inhibând competitiv legarea liganzilor naturali la receptori și blocarea transmisiei semnalului; În mod alternativ, poate intra în celulă și se poate lega de proteinele de transducție semnal, afectând fosforilarea proteinelor, defosforilarea și alte procese de modificare, interferarea cu transmisia și amplificarea semnalului. Această interferență cu căile de semnalizare celulară poate duce la disfuncții celulare, afectând procese precum proliferarea celulelor, diferențierea și apoptoza, care la rândul lor pot avea efecte adverse asupra dezvoltării normale și funcției țesuturilor și organelor.
Efecte asupra metabolismului celular
Metabolismul celular este termenul general pentru o serie de reacții chimice care apar în interiorul celulelor, oferind energie energetică și materială pentru activitățile de viață celulară . 3 peptida XFLAG poate afecta procesele metabolice celulare, interferează cu producția de energie celulară și sinteza substanțelor. De exemplu, acesta poate afecta funcția mitocondriilor, care sunt principalele site -uri pentru respirația aerobă și producția de energie în celule . 3 peptida XFLAG poate modifica permeabilitatea membranei mitocondriale și potențialul prin interacțiunea cu proteinele sau lipidele pe membrană, afectând sportul celular al lanțului respirator mitocondrial. În plus, peptida 3xFLAG poate interfera, de asemenea, cu procese intracelulare, cum ar fi metabolismul glucozei și metabolismul lipidelor, afectând echilibrul sintezei și descompunerii substanțelor în celule și având un impact negativ asupra funcțiilor fiziologice normale ale celulelor.
Profesional
Oferim o varietate de componente de transmisie, inclusiv pinioane, lanțuri cu role, angrenaje, cuplaje, rafturi, butucuri, scripete, mâneci conice, scaune la rulment și multe altele.
Tag-uri populare: 3xFLAG PEPTIDE CAS 402750-12-3, furnizori, producători, fabrică, en-gros, cumpărare, preț, vrac, de vânzare