Sephadex G75este un fel de umplutură de filtru cu gel cu performanțe bune. Este preparat prin reticularea dextranului și epiclorohidrinei. Este un gel în formă de mărgele, cu o cantitate mare de grupe hidroxil, care este ușor de umflat în soluții de apă și electrolit. Limita maximă de excludere a acestui compus este de 80000, iar gradul de umflare specific depinde de cantitatea de rășină uscată și condiții de funcționare. De exemplu, în anumite condiții, gradul de umflare a rășinii uscate poate fi de 519 ml/g. Când intervalul de pH de funcționare este de 6,210 (5.210 pentru unele produse), compusul poate rămâne stabil. Este recomandat să -l depozitați la temperatura camerei, răcoros și departe de lumină în intervalul de temperatură de 430 grade (sau 425 grade) pentru a -și menține performanța și stabilitatea. Această substanță este adecvată în special pentru biomoleculele mari cu o greutate moleculară mai mare de 80000. Utilizată în principal pentru desalinizare și înlocuirea tampon a biomoleculelor atât de mari. Printr -o operație de pas -, este posibilă desalinați rapid, eliminați poluanții și transferați molecule într -o nouă soluție tampon. Pe lângă desalinizare și înlocuirea tamponului, Sephadex G-75 este adecvat și pentru procesul de purificare a biomoleculelor mari.
 |
 |
Sephadex G75este un gel dextran, care este utilizat în principal pentru tehnologia de separare și purificare în biochimie și biologie moleculară. Principalele utilizări ale acestei substanțe sunt următoarele:
În procesul de desalinizare, poate elimina eficient sărurile (de obicei săruri anorganice cu molecule mici) din soluții moleculare biologice. Avantajul acestei substanțe este că este ușor de operat, rapid și poate obține o desalinizare eficientă fără a modifica activitatea biomoleculelor. În plus, datorită stabilității sale chimice excelente și biocompatibilității, este adecvată pentru tratamentul de desalinizare a diferitelor biomolecule, inclusiv proteine, peptide, acizi nucleici, etc. În aplicații practice, desaltarea gelului este de obicei combinată cu alte tehnologii de purificare, cum ar fi schimbul de ioni, cromatografie de afinitate, etc.
Această substanță are o gamă largă de aplicații în înlocuirea tamponului, în special în domeniile biochimiei și biologiei moleculare. De exemplu, în procesul de purificare a proteinelor, este uneori necesar să transferați proteinele de la un sistem tampon la un alt sistem tampon care este mai potrivit pentru stabilitatea și activitatea lor. Și această substanță poate atinge în mod eficient acest obiectiv; În procesul de extracție a acidului nucleic, este necesar să se separe acidul nucleic de soluția care conține impurități și săruri și să -l transferați într -un nou tampon pentru operațiuni ulterioare. De asemenea, se aplică acestui scenariu; În timpul culturii celulare, uneori este necesar să se înlocuiască mediul de cultură sau tampon pentru a menține creșterea și activitatea celulelor. Poate fi utilizat pentru a elimina substanțele nocive din media de cultură veche sau pentru a introduce noi suporturi de cultură sau tampoane.
Cernirea moleculară
În procesele de cercetare și pregătire proteică, este de obicei necesar să separat proteinele țintă de amestecurile complexe. Poate separa proteinele pe baza dimensiunii lor, obținând astfel purificarea proteinelor. Prin ajustarea condițiilor de eluție, cum ar fi rezistența ionică și valoarea pH -ului eluantului, eficiența de separare a proteinelor poate fi optimizată în continuare. În plus față de proteine și acizi nucleici, poate fi utilizat și pentru separarea și purificarea altor biomolecule, cum ar fi polizaharide, enzime, anticorpi, etc. Viteza de mișcare a acestor biomacromolecule în gel depinde de dimensiunea și forma lor, pentru a obține o separare eficientă. Deși această substanță nu este utilizată direct ca instrument pentru determinarea greutății moleculare, poate servi drept instrument auxiliar în determinarea greutății moleculare.
În procesul de purificare a proteinelor, este de obicei necesară eliminarea impurităților de molecule mici, cum ar fi săruri, metaboliți cu molecule mici, liganzi nelimitați, etc. din soluția proteică. Această substanță poate elimina eficient aceste impurități de molecule mici din soluțiile proteice, îmbunătățind astfel puritatea proteinelor. Efectul său de sită moleculară permite eliminarea eficientă a acestor impurități ale moleculelor mici, rezultând acizi nucleici mai puțini. Preparatele enzimatice conțin, de obicei, impurități de molecule mici, cum ar fi substraturi nereacționate, inhibitori, metaboliți, etc. Aceste impurități pot afecta activitatea și stabilitatea enzimelor. Prin filtrarea gelului materialului, aceste mici impurități moleculare pot fi îndepărtate eficient și puritatea preparatului enzimei poate fi îmbunătățită. Pe lângă proteine și acizi nucleici,
Simulați transducția semnalului intercelular
Transducția semnalului interlular este mecanismul de reglare de bază al activităților de viață, implicând procese complexe, cum ar fi recunoașterea celulelor, conversia semnalului și răspunsul fiziologic. Cercetarea tradițională se bazează adesea pe modele de celule vii, dar există limitări precum rețelele de semnal complexe și factori de interferență multipli.Sephadex G75este un mediu clasic de filtrare a gelului dextran. Structura sa poroasă și efectul sită moleculară oferă un model fizic unic pentru simularea transducției semnalului intercelular.
Un model fizic pentru simularea transducției semnalului intercelular folosind Sephadex G-75
Simularea joncțiunilor intercelulare de decalaj
Gap Junction este un canal hidrofil format între celulele adiacente printr -un linker, permițând schimbul liber de molecule mici cu o greutate moleculară<1500 Da. The pore size range of Sephadex G-75 (40-300 μ m) is much larger than that of intercellular junctions (about 1.5 nm), but its porous structure can simulate molecular diffusion processes in local microenvironments. For example:
Formarea gradientului de molecule de semnal: Concentrații diferite de molecule de semnal (cum ar fi cAMP, Ca ²+) sunt încărcate în coloana de gel. Diferența ratei de difuzie a moleculelor mici în porul gelului poate fi observată prin efectul de sită moleculară, iar transmiterea gradientului a semnalelor chimice între celule poate fi simulată.
Simulare de răspuns sinergic: Două molecule care interacționează (cum ar fi ligand și receptor) sunt încărcate pe ambele capete ale coloanei de gel, iar cinetica lor de legare este analizată prin diferența de timp de eluție pentru a simula procesul de recunoaștere moleculară în comunicarea de contact direct între celule.
Simularea contactului molecular pe suprafața membranei
Comunicarea dintre moleculele de suprafață a membranei se bazează pe interacțiunile specifice ale proteinelor de suprafață ale membranei celulare. Sephadex G-75 poate simula acest proces prin modificări funcționale:
Experimentul de legare a ligandului receptor: proteinele receptorilor biotinilate (cum ar fi EGFR) sunt fixate pe suprafața particulelor de gel, liganzii marcați fluorescent (cum ar fi EGF) sunt capturați prin sistemul de biotină streptavidină, iar intensitatea semnalului de legare este monitorizată cu un detector de fluorescență pentru a cuantifica afinitatea ligandului receptorului.
Analiză de legare competitivă: preîncărcați complexul ligandului receptor în coloana Gel, adăugați inhibitori competitivi ai diferitelor concentrații (cum ar fi anticorpii anti EGFR), calculați constanta de inhibare (KI) prin deplasarea vârfului de eluție și simulați efectul de intervenție al medicamentelor pe căile semnalului celular.
Simularea transmisiei semnalului chimic
Transducția semnalului chimic se bazează pe difuzarea moleculelor de semnalizare chimică (cum ar fi hormonii și citokinele) secretate de celule prin fluidele corporale sau matricea extracelulară pentru celulele țintă. Sephadex g - 75 poate construi un model de difuzie tridimensională:
Simularea sistemului paracrine: celulele secretorii (cum ar fi macrofagele) și celulele țintă (cum ar fi celulele T) sunt respectiv încapsulate în microsferele de gel, iar starea de activare a celulelor țintă (cum ar fi expresia CD69) este observată prin cultura CO pentru a simula efectul local al semnalelor paracrine.
Transmisia semnalului endocrină: hormonii etichetați fluorescent (cum ar fi insulina) sunt încărcați în coloana de gel, iar interacțiunea lor cu porii gelului este analizată în timpul eluției, iar jumătatea - viața hormonilor în circulația sângelui și distribuția organului țintă este prezisă prin combinarea modelelor matematice.
Cazul de aplicare al Sephadex G-75 în cercetarea de semnalizare a celulelor
Cercetări privind transducția semnalului globulelor roșii și funcția de integrină
Receptorul de adeziune a trombocitelor integrina IIB 3 este cea mai abundentă glicoproteină de pe suprafața membranei plachetare și este crucială pentru hemostaza și formarea trombului. Studiați utilizarea Sephadex G-75 pentru a simula interacțiunea dintre trombocite și colagenul subendotelial:
Modelul de activare a integrinei: integrina purificată IIB 3 a fost fixată pe suprafața particulelor de gel și s -a adăugat fibrinogen solubil (FG) ca ligand. Cinetica de legare a fost detectată prin rezonanță plasmonică de suprafață (SPR). S -a constatat că afinitatea integrinei la FG după activare a fost îmbunătățită semnificativ (KD a fost redusă de la μm la nm).
Screening de medicamente antiplachetare: Preîncărcare complex FG Integrină În coloana Gel, adăugați medicamente antiplachetare cu diferite concentrații (cum ar fi Tirofiban), calculați rata de inhibare a medicamentelor pe activitatea integrinei prin deplasarea vârfului de eluare și oferă o platformă de deplasare a derulării noi - pentru dezvoltarea de noi medicamente antitrombotice.
Reglarea căilor de semnalizare legate de tumori
Celulele tumorale promovează proliferarea și metastaza prin activarea anormală a căilor de semnalizare, cum ar fi MAPK și PI3K/AKT. Sephadex G-75 poate fi utilizat pentru a izola și purifica proteinele cheie pe căile de semnalizare:
Cercetarea căii de semnal EGFR: Proteina EGFR a fost purificată prin filtrarea gelului Sephadex G-75, iar starea sa de fosforilare a fost analizată prin spectrometrie de masă. S -a constatat că nivelul de fosforilare a site -urilor Y1068 și Y1086 ale EGFR a fost semnificativ crescut după stimularea EGF, care a activat semnalele ERK1/2 în aval.
Analiza mecanismului de rezistență la medicamente: în medicamente - celule canceroase gastrice rezistente (SGC7901/VCR), proteina UHRF1 a fost izolată și purificată de Sephadex G-75 și s-a constatat că supraexpresia sa poate inhiba activarea sensibilității de apoptoză (IC ₅ (cum ar fi caspase-3).
Semnalizarea celulelor imune și reglarea polizaharidelor
Polisacharide de alge roșii (BFP) îmbunătățesc răspunsul imun prin activarea căilor de semnalizare NF - κ B și MAPK în macrofage. Cercetări privind separarea și purificarea BFP și a componentelor sale (F1, F2, F3) folosind Sephadex G-75:
Polysaccharide component analysis: BFP, F1, F2 and F3 with purity>95% au fost obținute prin filtrarea gelului Sephadex G-75 combinată cu DEAE Celuloza 52 de cromatografie de schimb de ioni, iar greutățile lor moleculare au fost de 120 kDa, 85 kDa, 60 kDa și, respectiv, 45 kDa.
Activarea căii semnalului: în modelul de macrofag RAW264.7, BFP și componentele sale pot induce în mod semnificativ secreția de NO și TNF -, iar mecanismul său implică NF - κ B translocarea nucleară și fosforilarea JNK, ERK și P38 MAPK. Componentele purificate separate de Sephadex G - 75 au arătat că F1 a avut cel mai puternic efect de activare asupra căilor NF - κ B și MAPK (creșterea producției de 2,5 ori și TNF - secreție de 3 ori).
Tag-uri populare: Sephadex G75 CAS 37224-29-6, furnizori, producători, fabrică, en-gros, cumpărare, preț, vrac, de vânzare