Mellitin CAS 20449-79-0

Habermant a raportat că 1 μ Mol/L de peptidă cu venin de albine poate preveni proliferarea celulelor tumorale, dar nu inhibă creșterea și rata de clonare a celulelor normale.

Vlasak şi colab. a folosit transcripția inversă a ARNm-ADN pentru a construi o bibliotecă de ADNc a glandei veninului de matcă folosind plasmida pBR322. Ei au izolat ADNc-ul melitinei din această bibliotecă folosind ARNm total al glandei veninului de matcă ca sondă și l-au donat în continuare pe plasmida pUC18 pentru analiza secvenței ADN. Secvența de melitină prezisă din rezultatele analizei secvenței ADN a fost identică cu cea măsurată efectiv.

Zhang Qingwen a început să extragă ARN din glanda veninului de matcă pentru translație în ouă de vierme de bumbac, sintetizând cu succes Promelitin și studiind componentele ARNm extrase. Rezultatele au arătat că ARNm de-puritate ridicată a melitinei poate fi obținut prin îndepărtarea ARNr din ARN total.

Arora a comparat capacitatea de deteriorare anti-hipoxică a celulelor hepatice normale de șobolan cu celulele de cancer hepatic de șobolan și a confirmat că fosfolipaza A2 activată cu melitină (PLA2) poate ameliora rezistența celulelor canceroase hepatice la hipoxie. DUnn și colab. a fuzionat gena anticorpului SCFV derivată din celulele de mielom anti-umane de șoarece și proteinele specifice suprafeței celulei limfomului cu gena peptidei veninului de albine pentru a construi o genă anti-toxină care poate ucide celulele tumorale. Gena fuzionată a fost exprimată în E. coli, iar anti-toxina rafinată și-a demonstrat eficacitatea în distrugerea celulelor tumorale in vitro. Kindas și colab. a extras ARNm total din glandele veninoase ale reginei albinelor virgine și a constatat că ARNm de melitină conține aproximativ 400 de perechi de baze și o coadă poliA scurtă. [9] Experimentele Haase au arătat că melitina poate activa lipazele celulare, inclusiv fosfolipaza C (PLC), fosfolipaza D (PLD), fosfolipaza A2 (PLA2) și trigliceridele.

Li Jizhou și colab. a sintetizat gena peptidei veninului de albine prin transcripția inversă ADNc de mARN, folosind λ GT11 a stabilit o bibliotecă de ADNc a peptidei de venin de albine și a verificat clonele pozitive care exprimă peptida hemolitică a veninului de albine folosind sonde de anticorpi. Benachir et al. a folosit calceina ca marker fluorescent pentru a studia sistematic scurgerea membranei induse de melitina. Se crede că legarea întreMelitinăiar veziculele este foarte rapidă, iar sub acțiunea melitinei, unele vezicule își eliberează tot conținutul în timp ce altele rămân intacte. Raportul de eliberare a conținutului este legat de raportul molar melitină/lipide. Mai precis, melitina poate distinge între veziculele intacte și deja exsudate și indică faptul că prezența sarcinilor negative pe suprafața stratului dublu fosfolipidic are un efect inhibitor asupra capacității litice a melitinei, care este proporțională cu densitatea sarcinilor negative.

Kubo şi colab. a comparat melitina cu principalele proteine ​​alcaline ale eozinofilelor folosind cinci metode de testare citotoxică. Rezultatele au confirmat că melitina se poate introduce în membrana celulară a celulelor K562 și poate forma pori, provocând afluxul de Ca2+, creșterea concentrației intracelulare de Ca2+ și liza celulară. În decurs de 1 oră, melitina are un efect ucigător asupra tuturor celulelor leucemice experimentale. Shamsher et al. a descoperit că melitina poate activa fosfolipaza D și, ulterior, poate liza celulele umane de leucemie monocitară (U937).

Wang Guanlin și colab. a extras ARN total din glandele veninoase de albine și a amplificat ADNc al proteinei precursoare a melitinei prin RT-PCR. Ei au introdus în continuare site-uri de scindare a aminei înainte de secvența melitinei prin mutageneză țintită și au construit o secvență care a fost legată de melitina - Vectorul de expresie al proteinei mutante peptidei venin de albine fuzionat cu secvența parțială a galactozidazei, iar rezultatele analizei secvenței au arătat că au introdus cu succes codonul țintă și forma de galactozidă țintă. cadrul corect de citire și exprimă proteina mutagenă din Escherichia coli.

Huang Xueqiang și colab. a observat efectul pro apoptotic al melitinei asupra celulelor leucemice umane și a constatat că efectul melitinei 5 mg/mL asupra celulelor leucemice timp de 4 ore a fost diferit de cel al 4 ore μ Caracteristicile apoptotice tipice au fost observate după 24 de ore de tratament cu g/mL peptidă venin de albine. Experimente ulterioare au arătat că inducerea apoptozei celulare a fost corelată semnificativ cu o scădere a expresiei genei bcl-2. Wang Qiubo și colab. a sintetizat două fragmente de oligonucleotide de AB care conțin situsuri de clivaj specifice prin sinteză artificială și au format gena țintă sub acțiunea enzimei Klenow. Ei au folosit endonucleazele de restricție Hind III și Xmn I pentru a scinda simultan gena țintă și plasmida vectorului de expresie Pmal-p2 și au construit un recombinant dintre cele două sub acțiunea ligazei T4 - S-a folosit screening-ul complementar pentru a identifica clonele accesorii și s-au efectuat digestia cu enzime specifice și analiza de secvențiere pentru a se obține expresia clonelor recombinate a peptidei vecariotice.

Liu Ling și colab. a efectuat un studiu pe trei linii celulare de cancer hepatic, SMMC-7721, BEL{-7402 și Hep{-3B, folosind metoda MTT pentru a investiga relația doză-răspuns a melitinei în inhibarea tumorilor. Rezultatele au arătat că efectul inhibitor al melitinei asupra tumorilor a variat de la 8 la 64 μ La o doză de g/mL, rata de inhibare a tumorii a melitinei crește liniar și prezintă efecte antitumorale semnificative in vitro. Pe baza acestei speculații, poate fi legată de autoagregarea melitinei la concentrații mari. La concentrații mari, apare în cea mai mare parte într-o stare tetramerică, care este mai eficientă în legarea la membrana celulară în comparație cu monomerii, formând astfel canale ionice, modificând permeabilitatea membranei, spargerea membranei celulare și prezentând un puternic efect anti-tumoral in vitro.

Li Bai, Zhang Chen și alții au demonstrat prin cercetări de inginerie genetică că melitina are efectul de a induce apoptoza celulelor tumorale. După transfecția cu adenovirus recombinant purtător de genă melitină, unele celule de cancer hepatic au prezentat modificări morfologice, cum ar fi morfologia apoptotică, volum redus, rotunjime și agregare a marginii cromatinei la microscopie cu contrast de fază inversată. Adenovirusul recombinant purtător de gena melitină poate induce eficient apoptoza în celulele canceroase hepatice, cu o rată de apoptoză de aproximativ 20%, care este mai mare decât grupul de control fără adenovirus recombinant și adenovirus recombinant netransfectat. Acest lucru sugerează că inducerea apoptozei celulelor tumorale este, de asemenea, unul dintre mecanismele prin care funcționează terapia genică cu melitin.

Zhao Yahua și alții au modificat în mod intenționat secvența structurală primară a aminoacizilor din melitin șiMelitinăgenă prin experimente. Încercați să minimizați interacțiunea dintre melitin și meningele bacteriene, în principal prin invazia membranei în modul covor pentru a provoca sterilizarea. În același timp, datorită modificărilor numărului de sarcini și conformației moleculare, probabilitatea interacțiunii sale amfifile cu membrana celulelor sanguine este mult redusă, atingând astfel obiectivul de inhibare a hemolizei. Hemoliza veninului de albine modificat a fost semnificativ redusă în comparație cu activitatea de hemoliză a probei standard, de aproximativ 14,3 ori.

Pe 11 august 2009, Daily Mail din Marea Britanie a raportat că oamenii de știință de la Universitatea Washington din Statele Unite au lansat un rezultat al cercetării - folosind nanotehnologie, au dezvoltat o „nano albină” care poate fi văzută doar la microscop. „Albinele” pot pătrunde în celulele canceroase, pot elibera peptide de venin de albine și pot elimina celulele canceroase una câte una. Micuța albină are și substanțe de poziționare specializate în interior, care o pot ghida pe parcurs și pot ajunge direct în zona afectată. În experiment, „nano bee” a redus numărul de celule canceroase la șoarecii cu cancer de sân cu 45%, în timp ce numărul de celule canceroase la șoarecii cu cancer de piele a scăzut cu 75%.